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http://hdl.handle.net/1843/65278| Type: | Tese |
| Title: | Fosfolipase C delta 4 humana (hPLCδ4): uma proteína envolvida na proliferação e na diferenciação celular |
| Other Titles: | HUMAN PHOSPOLIPASE DELTA 4 (hPLCδ4): an protein involved in cellular proliferation and differentiation |
| Authors: | Marianna Kunrath Lima |
| First Advisor: | Dawidson Assis Gomes |
| First Co-advisor: | Jerusa Araújo Quintão Arantes Faria |
| First Referee: | André Ricardo Massensini |
| Second Referee: | Maria Elena de Lima Perez Garcia |
| Third Referee: | Deborah Schechtman |
| metadata.dc.contributor.referee4: | Claure Nain Lunardi Gomes |
| Abstract: | O Ca2+ é um importante segundo mensageiro que está envolvido na regulação de diversos processos celulares, como morte e proliferação. O aumento dos níveis intracelulares de Ca2+ pode se dar pela geração de inositol 1, 4, 5-trisfosfato (InsP3), resultante da hidrólise de fosfatidilinositol 4, 5-bisfosfato (PIP2) por fosfolipases C (PLCs), que leva à liberação de Ca2+ pelos receptores de InsP3 (InsP3R). A liberação de Ca2+ pode acontecer tanto no citosol quanto no núcleo, via PLCs, mas pouco se conhece sobre a ativação destas proteínas no núcleo. O objetivo deste trabalho foi estudar a função da PLCδ4 em células mesenquimais. Esta proteína tem sido apontada como uma proteína nuclear e parece estar envolvida em processos proliferativos. Nesta tese, foram utilizadas duas células humanas mesenquimais: as células tumorais SK-HEP-1 e células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo (hASC) para a caracterização fenotípica de PLCδ4 humana (hPLCδ4). Em SK-HEP-1, o silenciamento de hPLCδ4 por RNA de interferência reduziu a proliferação celular, sem aumento da morte celular, mas com aumento da porcentagem de células nas fases G1 e G2/M do ciclo celular e redução da expressão das ciclinas A, B1 e H. Em hASC, primeiramente foi feita a localização subcelular de hPLCδ4, utilizando-se microscopia confocal. Esta proteína mostrou-se predominantemente nuclear, e ensaios de fracionamento celular também mostraram a presença de hPLCδ4 no núcleo de hASC. Em análises de expressão proteica após diferenciação celular, foi visto que a expressão de PLCδ4 aumentou com a diferenciação adipogênica, mas não com a diferenciação osteogênica. O knockdown de PLCδ4 em hASC, assim como em SK-HEP-1, diminuiu a proliferação celular, sem aumento da morte celular. Entretanto, para as células silenciadas foi observado um aumento do número de células apenas na fase G1 do ciclo celular, com redução do número de células em interfase e G2/M. A redução da expressão de PLCδ4 em hASC levou a um aumento da porcentagem de células senescentes, o que poderia explicar a redução da proliferação destas células. Desse modo, os resultados obtidos mostram que a PLCδ4 humana está envolvida em processos de proliferação e diferenciação celular, sendo estes processos possivelmente mediados pelo Ca2+ nuclear. |
| Abstract: | Ca2+ is an important second messenger within cells, and it is involved in many cellular processes, like death and proliferation. The raise in intracellular Ca2+ levels can be due to the generation of inositol 1, 4, 5-trisphosphate (InsP3), which is a product of phosphatidylinositol 4, 5-bisphosphate (PIP2) hydrolysis by phospholipases C (PLCs) that leads to Ca2+ release by InsP3R. Ca2+ release can occur in both cytosol and nucleus, via PLCs, but little is known about these enzymes’ activation in the nucleus. The objective of this work was to study PLCδ4 function in mesenchymal cells. This protein, which has not been extensively studied, has been pointed out as nuclear and it has a possible role in proliferative processes. In this thesis, two human mesenchymal cell models were used to phenotypically characterize human PLCδ4 (hPLCδ4): SK-HEP-1 tumor cells and human adipose-derived stem cells (hASC). In SK-HEP-1, hPLCδ4 silencing by siRNA reduced cell proliferation, without cell death increase, but with an increase in the percentage of cells on G1 and G2/M cell cycle phases and reduction in the expression of cyclins A, B1 and H. For hASC, initially we proceeded to the subcellular localization of hPLCδ4, using confocal microscopy. This protein showed to be mainly nuclear, being the nuclear presence of hPLCδ4 confirmed by cell fractionation. When hASC were submitted to cell differentiation, it was observed an increase in PLCδ4 protein expression after adipogenic differentiation, but this increase was not observed for cells that were incubated with osteogenic inducers. hASC PLCδ4 knockdown, as for SK-HEP-1, showed reduced cell proliferation, without cell death increase. However, for silenced cells it was observed an increase of cells on G1 and a reduction of cells on interphase and G2/M. PLCδ4 silencing increased the percentage of senescent cells in hASC, what could explain the reduction in cell proliferation. Thus, these data show that human PLCδ4 is in involved in cellular differentiation and cellular proliferation, being these processes possibly mediated by nuclear Ca2+. |
| Subject: | Bioquímica e imunologia Sinalização do Cálcio Proliferação de Células Diferenciação Celular Senescência Celular Fosfolipase C delta |
| language: | por |
| metadata.dc.publisher.country: | Brasil |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| metadata.dc.publisher.department: | ICB - DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIA |
| metadata.dc.publisher.program: | Programa de Pós-Graduação em Bioquímica e Imunologia |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/65278 |
| Issue Date: | 5-Feb-2018 |
| Appears in Collections: | Teses de Doutorado |
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