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http://hdl.handle.net/1843/65654| Type: | Dissertação |
| Title: | Identificação de espermátides em testículo humano pelo método de sonicação para aplicação em reprodução assistida |
| Authors: | Lilian Massara Martinelli |
| First Advisor: | Hélio Chiarini-Garcia |
| metadata.dc.contributor.advisor2: | Augusto Barbosa Reis |
| Abstract: | Azoospermia é uma condição de infertilidade caracterizada pela ausência de espermatozoides no ejaculado. Em muitos casos, a paternidade só pode ser alcançada com o auxílio da reprodução assistida, isto é, com a extração de espermatozoides de fragmentos testiculares e posterior injeção intracitoplasmática dos mesmos (ICSI), processo conhecido como fertilização in vitro. Para extração dos espermatozoides têmse utilizado métodos de busca sob microscópio de luz, através de fragmentação mecânica manual, muitas vezes sem sucesso. No entanto, não se sabe se o fato de não ter encontrado espermatozoides é por ausência dos mesmos no testículo ou por falha no método de busca. O presente estudo avaliou a eficácia do método de sonicação de fragmentos testiculares, que emprega dissociação do tecido testicular e degeneração de células, com exceção das cabeças de espermátides alongadas, visando determinar com mais acurácia a presença desse tipo celular nos testículos de pacientes com azoospermia. A análise histopatológica dos testículos mostrou que em todos os pacientes, os testículos apresentavam características semelhantes, típicas de hipoespermatogênese (escore de Johnsen ~ 8). A preservação das cabeças de espermátides após sonicação, em diferentes combinações de frequência e tempo, foi verificada pelo método de concentração, por Cytospin, do homogeneizado em lâmina, seguido de coloração com kit Panótico. A combinação de 60Hz por 90s de sonicação mostrou ser a melhor para manter íntegras as cabeças de espermátides e eliminar demais tipos celulares. Quando se realizou a predição da produção espermática a partir da contagem de cabeças de espermátides obtidas por sonicação, verificou-se que não houve diferença entre as diferentes combinações de frequência e tempo testadas, independente da microscopia utilizada para a contagem, fluorescência ou contraste de fase. Dessa forma, todas as combinações poderiam ser aplicadas, no entanto, levando-se em conta a maior preservação de espermátides íntegras isoladas, atestada pelo método do Cytospin, sugere-se a combinação 60Hz/90s para a predição da produção espermática. |
| Abstract: | Azoospermia is an infertility condition characterized by the absence of spermatozoa in the ejaculate. In many cases, paternity can only be achieved by assisted reproduction, i.e. with testicular sperm extraction and subsequent intracytoplasmic spermatozoa injection (ICSI), a process known as in vitro fertilization. For spermatozoa extraction manual mechanical fragmentation of testicular parenchyma and search of spermatozoa under light microscope are frequently used with no complete success. However, it is unknown whether the fact of not having found sperm is by their absence in the testis or failure in the search method. This study evaluated the efficacy of sonication method of testicular fragments, employing dissociation of testicular tissue and degeneration of cells, with the exception of elongated spermatid heads, in order to determine more accurately the presence of this cell type in the testis of patients with azoospermia. Histopathological analysis of the testes showed that in all patients, the testes were similar, with typical hypospermatogenesis (Johnsen score ~ 8). The preservation of the spermatid heads after sonication using different combinations of frequency and time, was verified by the method of concentration of the sonication product by Cytospin followed by staining with the kit Panotic. The combination 60Hz/90s of sonication proved to be the best to keep the integrity of the heads of spermatids besides the elimination of other cell types. When carried out the prediction of sperm production from spermatid heads counting, it was found that there was no difference between the different combinations of frequency and time tested, regardless of the microscopy used for counting, fluorescence or phase-contrast. Thus, all combinations could be applied, however, taking in account the better preservation of isolated intact spermatid heads, attested by Cytospin method, we suggest the combination 60Hz / 90s to predict sperm production. |
| Subject: | Biologia Celular Azoospermia Espermátides Testículos |
| language: | por |
| metadata.dc.publisher.country: | Brasil |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| metadata.dc.publisher.department: | ICB - DEPARTAMENTO DE MORFOLOGIA |
| metadata.dc.publisher.program: | Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular |
| Rights: | Acesso Aberto |
| metadata.dc.rights.uri: | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/ |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/65654 |
| Issue Date: | 29-Jul-2016 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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