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http://hdl.handle.net/1843/72352
Type: | Dissertação |
Title: | Desenho, produção e caracterização de proteína multiepitópica recombinante para a produção de soro anti-Micrurus corallinus |
Authors: | Gladstony de Oliveira Souza |
First Advisor: | Carlos Delfin Chavez Olortegui |
metadata.dc.contributor.advisor2: | Clara Guerra Duarte |
First Co-advisor: | Clara Guerra Duarte |
First Referee: | Flavio Almeida Amaral |
Second Referee: | Henrique Roman Ramos |
Abstract: | Parte dos acidentes ofídicos brasileiros é causada por cobras corais e o tratamento específico é o Soro Antielapídico (SAEL), produzido contra o veneno das espécies M. corallinus e M. frontalis. A disponibilidade da peçonha de M. corallinus é escassa, impactando diretamente a cadeia de produção do SAEL no país. Este trabalho visa definir, produzir e validar uma Proteína Multi-Epitópica recombinante (PMEr-cor) como imunógeno alternativo para substituir, ao menos em parte, o veneno de M. corallinus na produção do SAEL. Para atingir este objetivo, foi construída uma sequência composta por epítopos previamente validados e por novas sequências epitópicas mapeadas in silico das principais toxinas do veneno de M. corallinus – Toxinas de três dígitos e Fosfolipases do tipo A2. O gene que codifica este imunógeno foi clonado e transformado em cepas de E. coli BL21DE3. A PMEr-cor foi expressa, purificada, caracterizada imunoquimicamente e utilizada na imunização de coelhos. Um grupo de animais foi inoculado com a PMER-cor para caracterização de seu potencial imunogênico; outro grupo foi imunizado com a PMER-cor substituindo a peçonha de M. corallinus, acrescida do veneno de M. frontalis; e no terceiro grupo foram administrados os venenos brutos, simulando a produção do SAEL. Foi visto que a PMER-cor é imunogênica, sem, no entanto, induzir proteção frente aos venenos brutos de Micrurus sp quando utilizada sozinha. Já a caracterização do soro produzido contra a PMEr-cor juntamente com o veneno de M. frotalis demonstrou melhor desempenho preliminar em ensaios de neutralização da ação do veneno in vitro e in vivo. Apesar de não ser eficaz como um imunógeno substitutivo ao veneno de M. corallinus, após aperfeiçoamento da composição de epítopos e espaçadores, a PMEr-cor poderia contribuir para a atualização biotecnológica da cadeia de produção do SAEL. |
Abstract: | A part of Brazilian snakebites are caused by coral snakes and the specific treatment against it is the use of Antielapidic antivenom (SAEL), produced against the venom of the species M. corallinus and M. frontalis. The availability of M. corallinus venom is low, which impacts directly the SAEL production chain in Brazil. This work aims to design, produce and validate a recombinant Multi- Epitopic Protein (PMEr-cor) as an alternative immunogen to replace, at least in part, M. corallinus venom in the production of SAEL. To achieve this goal, a sequence composed of previously validated epitopes, including new epitopic sequences mapped in silico of the main toxins of M. corallinus venom (Three- digit toxins and Phospholipases of type A2), was constructed. The gene encoding this immunogen was cloned and transformed into E. coli BL21DE3. PMEr-cor was expressed, purified, immunochemically characterized and used to immunize rabbits. A group of animals was inoculated with PMER-cor to characterize its immunogenic potential; another group was immunized with PMER-cor replacing M. corallinus venom, added to M. frontalis venom; and in the third group, the crude venom of the two species were administered, simulating the production of SAEL. As a result, PMER-cor was proven immunogenic, yet without inducing protection against the crude Micrurus sp venoms when used alone. The characterization of the antibodies produced against PMEr-cor together with M. frontalis venom demonstrated better preliminary performance in neutralization assays of the in vitro and in vivo venom's action. Although PMER-cor has notproven to be effective as a substitute immunogen for M. corallinus venom, after improving the composition of epitopes and spacers used, it could contribute to the biotechnological update of the SAEL production chain. |
Subject: | Bioquímica e imunologia Antivenenos Cobras Corais Epitopos |
language: | por |
metadata.dc.publisher.country: | Brasil |
Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
Publisher Initials: | UFMG |
metadata.dc.publisher.department: | ICB - DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIA |
metadata.dc.publisher.program: | Programa de Pós-Graduação em Bioquímica e Imunologia |
Rights: | Acesso Aberto |
URI: | http://hdl.handle.net/1843/72352 |
Issue Date: | 22-Nov-2023 |
Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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Dissertação_mestrado_Gladstony_2023.pdf | Arquivo em PDF da Dissertação apresentada ao Programa de Bioquímica e Imunologia para obtenção do título de mestre em Bioquimica e Imunologia pelo aluno Gladstony de Oliveira Souza em 2023. | 4.13 MB | Adobe PDF | View/Open |
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