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http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8GYKJ9| Type: | Tese de Doutorado |
| Title: | Mecanismos moleculares envolvidos na apoptose induzida pelo vírus da cinomose canina in vivo e in vitro |
| Authors: | Helen Lima Del Puerto |
| First Advisor: | Anilton Cesar Vasconcelos |
| First Co-advisor: | Amy Milsted |
| metadata.dc.contributor.advisor-co2: | Almir de Sousa Martins |
| First Referee: | Milene Alvarenga Rachid |
| Second Referee: | Tatiane Alves da Paixao |
| Third Referee: | Silvana Maria Medeiros de Souza Silva |
| metadata.dc.contributor.referee4: | Deoclecio Alves Chianca Junior |
| Abstract: | A cinomose canina (CC) é uma doença imunossupressiva causada pelo vírus da cinomose canina (VCC), que pode acarretar complicações no SNC. Cães naturalmente infectados pelo VCC apresentam células em apoptose no tecido linfóide e cerebelo, mas os mecanismos da apoptose na infecção pelo VCC ainda não foram bem descritos. O objetivo desse estudo foi avaliar as vias de apoptose na infecção pelo VCC analisando a expressão de mRNA dos genes anti e pro apoptóticos Bax, Bcl-2, Caspases 3, -8 e -9 em sangue periférico, linfonodos e cerebelo de cães naturalmente infectados pelo VCC (VCC+) e de cães não infectados pelo VCC (VCC-). Amostras de sangue de 20 cães clinicamente suspeitos da infecção pelo VCC e de 12 cães clinicamente saudáveis foram utilizadas para a detecção do vírus através da técnica de RT-PCR, e para análise hematológica. As amostras de sangue, cerebelo e linfonodo foram submetidas a extração de RNA total. Após o resultado de detecção do vírus por RT-PCR, foram selecionadas 12 amostras de sangue de cães infectados (VCC+) e 8 amostras de sangue de cães não infectados (VCC-). Dentre os 12 cães VCC+, 4 foram submetidos à necropsia, e amostras de cerebelo e linfonodo foram coletadas. Dentre os 8 cães VCC-, 3 foram submetidos à necropsia, e amostras de linfonodo e cerebelo foram coletadas. As amostras de RNA foram reverso transcritas e a expressão dos genes alvos quantificada pela PCR em tempo real. Teste t de Student não pareado foi utilizado para a estatística comparando-se os grupos VCC+ e VCC-, e as diferenças considerados estatisticamente significantes quando p<0.05. O diagnóstico do VCC através da RT-PCR nos 20 cães clinicamente suspeitos resultou em 12 cães positivos (60%), e dos 12 cães clinicamente sadios, 8 foram confirmados negativos (67%). O resultado da expressão dos genes Caspases 3, -8, -9, Bax e Bcl-2 em sangue periférico não apresentou diferença estatística entre os cães VCC+ (n=12) e VCC- (n=8), assim como os resultados hematológicos (p>0.05). Os resultados da expressão de Bax, Caspase 3, - 8 e -9 em cerebelo foi signifativamente maior (p<0.05) nos cães VCC+ (n=4) em comparação com os cães VCC- (n=3). Adicionalmente, a expressão de Caspase 3 e -8 foi significativamente maior (p<0.05) em linfonodos de cães VCC+ (n=4) quando comparado com os cães VCC- (n=3). Os resultados da RT-PCR para o diagnóstico do VCC foi capaz de detectar o vírus em cães clinicamente saudáveis, o que a torna uma ferramenta sensível e específica para o diagnóstico do VCC e para futuros estudos epidemiológicos. Os resultados sugerem que o VCC induz apoptose em linfonodos através da ativação de Caspase 3, iniciada pela Caspase 8; e a indução no cerebelo através da ativação da Caspase 3, iniciada pela Caspase 8 e pela via mitocondrial através da Caspase 9. |
| Abstract: | Canine distemper (CD) is an immunosuppressive disease caused by the canine distemper virus (CDV). Pathogenesis includes mainly complications in the CNS and immunosuppression that are not completely understood. Dogs naturally infected with CDV show apoptotic cells in lymphoid tissues and cerebellum, but the apoptotic mechanism is not well characterized. Thus, in this study we evaluated the expression of Bax, Bcl-2, Caspases 3, -8 and -9 mRNA in the peripheral blood, lymph nodes and cerebellum of CDV infected (CDV+) and non-infected (CDV-) dogs by real-time PCR. Blood samples from 12 CDV+ and 8 CDV- dogs, diagnosed by RT-PCR, were used for hematological analysis and to evaluate apoptotic gene expression using real-time PCR. Cerebellum and lymph nodes of 4 CDV+ and 3 CDV- dogs were also used in real-time PCR. No significant differences were statistically found in the expressions of Caspase 3, -8, -9, Bax and Bcl-2 mRNA or in the hematological results between CDV+ and CDV- dogs. Expressions of Bax, Caspase 3, -8 and -9 was significantly higher (p<0.05) in CDV+ cerebellum compared to CDV- dogs. In addition, expressions of Caspase 3 and -8 were significantly higher (p<0.05) in the lymph nodes of CDV+ compared to CDV- dogs. These findings suggest that CDV induces apoptosis in the cerebellum and lymph nodes in different ways. Lymph node apoptosis might occur via Caspase 3 activation, through the Caspase 8 pathways, and cerebellum apoptosis might occur via Caspase 3 activation, through Caspase 8 and through the mitochondrial pathway. |
| Subject: | RNA mensageiro Patologia Cinomose Vírus da cinomose canina Sistema nervoso central Apoptose Cães Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8GYKJ9 |
| Issue Date: | 26-Feb-2010 |
| Appears in Collections: | Teses de Doutorado |
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