Criopreservação de sêmen equino em diluidores contendo os antioxidantes lactoferrina e catalase.
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Rodrigo Costa Mattos
Fernanda Radicchi Campos Lobato de Almeida
Fernanda Radicchi Campos Lobato de Almeida
Resumo
O objetivo do presente trabalho foi melhorar a qualidade do espermatozoide criopreservado
equino com a adição de lactoferrina (Lf) e catalase (Cat) a um diluidor de congelamento de
sêmen e avaliar a capacidade fecundante. O sêmen foi congelado com os diluidores: C1)
Controle, INRA 82; C2) C1 + 500μg/mL Lf, e C3) C1 + 200 UI/mL Cat. Foram avaliados
espermatozoides quanto a motilidade computadorizada (CASA), funcionalidade e integridade
de membrana espermática, reação acrossômica espontânea, concentração de Ferro e espécies
reativas ao oxigênio. Para avaliar a capacidade fecundante, os espermatozoides foram
submetidos aos protocolos de capacitação e hiperativação (H2 e H3) : H1) Controle: meio
Whitten’s capacitante, H2) H1 + 5mM Procaína, H3) H1 + 5µM Calcio Ionóforo A23187
(CaI). Estes foram analisados quanto à motilidade (CASA), taxa de reação acrossômica, de
integridade de membrana espermática, e ligação espermática a zona pelúcida (ZP) de oócito
bovino. A concentração de Fe livre foi menor e a taxa de espermatozoides com membrana
funcional foi maior no grupo com Lf comparado ao controle (P<0.05). O número de
espermatozoides ligados a ZP bovina não diferiu entre o grupo hiperativado com Procaina e o
capacitado com o meio de Whitten’s, no entanto, foi inferior no grupo hiperativado com o
CaI. Concluiu-se que a adição de Lf foi benéfica à qualidade do sêmen criopreservado
enquanto o CaI foi prejudicial a ligação do espermatozoide a ZP.
Abstract
The objective of this study was to improve frozen sperm quality with the addition of
lactoferrin (Lf) and catalase (Cat) to an equine semen freezing extender and evaluate the in
vitro fertilizing ability. Semen was frozen with the extenders: C1) Control INRA 82, C2) C1
+ 500μg/mL Lf, and C3) C1 + 200 IU/mL Cat. Sperm motility characteristics, membrane
integrity and functionality, spontaneous acrosome reaction, iron and reactive oxygen species
concentrations were evaluated. To estimate the in vitro fertilizing ability, the sperm were
submitted to the capacitation and hyperactivation (H2 and H3) protocols: H1) Control:
modified Whitten’s capacitation medium, H2) H1+Procaine 5mM, H3) H1+Calcium
Ionophore A23187 5μM (CaI). Sperm motility (CASA), acrosome reaction and membrane
integrity rates were analysed and bovine sperm zona pellucida (ZP) binding assay performed.
The iron concentration was lower and membrane functionality was higher in the Lf treated
sperm compared to the control group (P<0.05). The number of bovine ZP sperm binded did
not differ between the capacitated with Whitten’s medium and Procaine hiperactivated sperm,
however, it was lower in the CaI hiperactivated group. It was concluded that the addition of
Lf was beneficial to the frozen equine semen quality while CaI was detrimental to the ZP
sperm binding.
Assunto
Palavras-chave
espermatozóide, Antioxidantes, Criopreservação, Equino, Sêmen