Avaliação do acometimento cardíaco em camundongos BALB/C infectados por Paracoccidioides brasiliensis
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Dissertação de mestrado
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Resumo
A paracoccidioidomicose é uma doença sistêmica, endêmica da América Latina,
causada por fungos dimórficos do gênero Paracoccidioides. Embora a via primária
de infecção seja a pulmonar, pela inalação de conídios, vários sítios anatômicos
podem ser acometidos pela disseminação linfoematogênica, inclusive o coração.
Estudos demonstram a complexidade da doença causada pelo P. brasiliensis e
revelam a necessidade de se investigar os locais onde o fungo se aloja, uma vez
que acometimento cardíaco pode estar sendo subdiagnosticado. O objetivo deste
trabalho foi identificar e caracterizar a colonização do fungo no coração de
camundongos infectados pelo P. brasiliensis. Camundongos BALB/c foram
infectados com a cepa virulenta Pb18 de P. brasiliensis os quais foram eutanasiados
com 7, 15, 30 e 60 dias após a infecção. O coração foi removido e utilizado para os
seguintes procedimentos experimentais: recuperação do fungo em meio de cultura;
análise histológica por diferentes colorações para detectar o fungo e a reação
inflamatória no tecido cardíaco; nested PCR para evidenciar o material genético do
fungo no tecido; e quantificação das citocinas IL-4, IL-6, IL-10 e TNF-α no tecido.
Parte dos animais foi imunossuprimido por radiação gama e eutanasiados após 7
dias de infecção para avaliar a recuperação de colônias do tecido cardíaco em meio
de cultura. As células fúngicas recuperadas do tecido cardíaco se mostraram viáveis
e virulentas. A visualização do amplicon do fungo pela técnica do PCR confirmaram
a presença do P. brasiliensis no tecido cardíaco. As análises histológicas revelaram
um infiltrado inflamatório granulomatoso apresentando fibras colágenas ao redor dos
fungos corroborando aos achados de ELISA que revelaram uma elevação dos níveis
de TNF-α no tecido cardíaco. Esses achados demonstraram a capacidade do fungo
de colonizar o tecido cardíaco e desenvolver reações inflamatórias características de
Paracoccidioidomicose.
Abstract
Paracoccidioidomycosis is a systemic disease, endemic in Latin America, caused by
dimorphic fungi of Paracoccidioides genus. Even though the primary pathway of
infection is pulmonary, by inhalation of conidia, several anatomical sites may affected
by lymphoematogenic dissemination, including the heart. Studies demonstrate the
complexity of the P. brasiliensis caused disease and reveal a necessity to investigate
the microorganism infection sites, so the involvement may be underdiagnosed. The
aim of this work was to identify and characterize fungal colonization in the heart of P.
brasiliensis infected mice. BALB/c mice were infect with virulent Pb18 strain of P.
brasiliensis that euthanized at 7, 15, 30 and 60 days after infection. The heart was
removed and used for the following experimental procedures: fungi recovery culture
medium; histological analysis using different methodologies to detect fungi and
inflammatory reaction in cardiac tissue; nested PCR to evidence fungi genetic
material in the tissue; quantification of the cytokines IL-4, IL-6, IL-10 and TNF-α
cytokines in the tissue by ELISA method. Some animals were immunosuppressed by
gamma radiation and euthanized after 7 days of infection to fungi recovery of cardiac
tissue in culture medium and rate survival of the animals. Fungal cells recovered from
cardiac tissue were viable and virulent. Visualization of the amplicon of the fungus by
the PCR technique confirmed the presence of P. brasiliensis in cardiac tissue. As
histological analyzes revealed a granulomatous inflammatory infiltrate presenting
collagen fibers around the fungi corroborating the ELISA findings that revealed
elevated levels of TNF-α in cardiac tissue. These results demonstrated fungi
colonization and development of inflammatory reactions in the heart of P. brasiliensis
infected mice, characteristic of Paracoccidioidomycosis.
Assunto
Microbiologia, Paracoccidioidomicose, Miocárdio
Palavras-chave
Paracoccidioidomicose, Disseminação da PCM, Tecido cardíaco, Paracoccidioides brasiliensis