Immunogenic mapping of rDyn-1 and rKDDR-plus proteins and selection of oligopeptides by immunoblotting for the diagnosis of Leishmania infantum-infected dogs
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Resumo
Endemic in Brazil, visceral leishmaniasis (VL) is a zoonotic infection that is among the most important parasitic diseases transmitted by vectors. Dogs are the main reservoirs of canine leishmaniasis (CanL) and their identification is used in some countries as part of disease prevention and control measures in the canine and human population. In this context, serological tests are necessary, composed of antigens capable of correctly identifying infected dogs, minimizing the number of false-negative cases. This study aimed to identify more immunoreactive peptides derived from two previously described whole proteins (rDyn-1 and rKDDR-plus) and compare their performance to the control antigens rK39 and the crude extract for the detection of dogs infected with L. infantum, especially the asymptomatic ones. The three selected peptides and a mixture of them, along with the rDyn-1, rKDDR-plus, rK39, and crude extract antigens were evaluated using indirect ELISA with sera samples from 186 dogs with CanL, being asymptomatic (n = 50), symptomatic (n = 50), co-infected (n = 19), infected with Babesia sp. (n = 7), Ehrlichia sp. (n = 6), T. cruzi (n = 20) and uninfected (n = 34). The results showed that the rDyn-1 protein and the peptide mixture had the highest sensitivity (100% and 98.32%, respectively) and specificity (97.01 and 98.51, respectively). A high degree of kappa agreement was found for rDyn-1 protein (0.977), mixed peptides (0.965), rKDDR-plus protein (0.953), K-plus peptide 1 (0.930) and Dyn-1 peptide (0.893). The mixture of peptides showed the highest likelihood (65.87). The ELISA using the mixture of peptides and the rDyn-1 protein showed high performance for CanL serodiagnosis. More mix combinations of the peptides and additional extended field tests with a larger sample size are recommended.
Abstract
Endêmica no Brasil, a leishmaniose visceral (LV) é uma infecção zoonótica que está entre as mais importantes doenças parasitárias transmitidas por vetores. Os cães são os principais reservatórios da leishmaniose canina (LCa) e sua identificação é utilizada em alguns países como parte das medidas de prevenção e controle de doenças na população canina e humana. Nesse contexto, são necessários testes sorológicos, compostos por antígenos capazes de identificar corretamente os cães infectados, minimizando o número de casos falso-negativos. Este estudo teve como objetivo identificar mais peptídeos imunorreativos derivados de duas proteínas inteiras previamente descritas (rDyn-1 e rKDDR-plus) e comparar seu desempenho aos antígenos controle rK39 e ao extrato bruto para a detecção de cães infectados com L. infantum, especialmente os assintomáticos. Os três peptídeos selecionados e uma mistura deles, juntamente com os antígenos rDyn-1, rKDDR-plus, rK39 e extrato bruto foram avaliados usando ELISA indireto com amostras de soros de 186 cães com CanL, sendo assintomáticos (n = 50), sintomáticos (n = 50), coinfectados (n = 19), infectados com Babesia sp. (n = 7), Ehrlichia sp. (n = 6), T. cruzi (n = 20) e não infectados (n = 34). Os resultados mostraram que a proteína rDyn-1 e a mistura de peptídeos apresentaram a maior sensibilidade (100% e 98,32%, respectivamente) e especificidade (97,01 e 98,51, respectivamente). Um alto grau de concordância kappa foi encontrado para a proteína rDyn-1 (0,977), peptídeos mistos (0,965), proteína rKDDR-plus (0,953), peptídeo K-plus 1 (0,930) e peptídeo Dyn-1 (0,893). A mistura de peptídeos apresentou a maior probabilidade (65,87). O ELISA usando a mistura de peptídeos e a proteína rDyn-1 apresentou alto desempenho para o sorodiagnóstico de CanL. Mais combinações de peptídeos e testes de campo estendidos adicionais com um tamanho de amostra maior são recomendados.
Assunto
Leishmania infantum, Leishmaniose visceral, Cães, Immunoblotting
Palavras-chave
Citação
Curso
Endereço externo
https://journals.plos.org/plosntds/article?id=10.1371/journal.pntd.0011535