Application of rapid in vitro co-culture system of macrophages and T-cell subsets to assess the immunogenicity of dogs vaccinated with live attenuated Leishmania donovani centrin deleted parasites (LdCen −/− )
Carregando...
Data
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Artigo de periódico
Título alternativo
Aplicação de co-cultura in vitro rápida sistema de macrófagos e subconjuntos de células T para avaliar a imunogenicidade de cães vacinado com Leishmania viva atenuada donovani centrin deletou parasitas (LdCen −/− )
Primeiro orientador
Membros da banca
Resumo
Background: Live attenuated Leishmania donovani parasites as LdCen−/− were shown to confer protective
immunity against Leishmania infection in mice, hamsters, and dogs. Strong immunogenicity in dogs vaccinated
with LdCen−/− has been previously reported, including increased antibody response favoring Th1 response
lymphoproliferative responses, CD4+ and CD8+ T-cells activation, increased levels of Th1 and reduction of Th2
cytokines, in addition to a significant reduction in parasite burden after 18 and 24 months post virulent parasite
challenge.
Methods: Aimed at validating a new method using in vitro co-culture systems with macrophages and purified CD4+
or CD8+ or CD4+
:CD8+ T-cells of immunized dogs with both LdCen−/− and Leishmune® to assess microbicide capacity
of macrophages and the immune response profile as the production of IFN-γ, TNF-α, IL-12, IL-4 and IL-10 cytokines.
Results and discussion: Our data showed co-cultures of macrophages and purified T-cells from dogs immunized with
LdCen−/− and challenged with L. infantum were able to identify high microbicidal activity, especially in the co-culture
using CD4+ T-cells, as compared to the Leishmune® group. Similarly, co-cultures with CD8+ T-cells or CD4+
:CD8+ T-cells in
both experimental groups were able to detect a reduction in the parasite burden in L. infantum infected macrophages.
Moreover, co-cultures using CD4+ or CD8+ or CD4+
:CD8+ T-cells from immunized dogs with both LdCen−/− and
Leishmune® were able to identify higher levels of IFN-γ and IL-12 cytokines, reduced levels of IL-4 and IL-10, and a higher
IFN-γ/IL-10 ratio. While the highest IFN-γ levels and IFN-γ/IL-10 ratio were the hallmarks of LdCen−/− group in the coculture using CD4+ T-cells, resulting in strong reduction of parasitism, the Leishmune® immunization presented a
differential production of TNF-α in the co-culture using CD4+
:CD8+ T-cells. Conclusion: The distinct conditions of co-culture systems were validated and able to detect the induction of immune
protection. The method described in this study applied a new, more accurate approach and was able to yield laboratory
parameters useful to test and monitor the immunogenicity and efficacy of Leishmania vaccines in dogs.
Abstract
Antecedentes: Parasitas Leishmania donovani vivos atenuados como LdCen-/- demonstraram conferir proteção
imunidade contra a infecção por Leishmania em ratos, hamsters e cães. Forte imunogenicidade em cães vacinados
com LdCen-/- foi relatado anteriormente, incluindo aumento da resposta de anticorpos favorecendo a resposta Th1
respostas linfoproliferativas, ativação de células T CD4+ e CD8+, aumento dos níveis de Th1 e redução de Th2
citocinas, além de uma redução significativa na carga parasitária após 18 e 24 meses após o parasita virulento
desafio.
Métodos: Visa validar um novo método utilizando sistemas de cocultura in vitro com macrófagos e CD4+ purificados
ou CD8+ ou CD4+
:Células T CD8+ de cães imunizados com LdCen−/− e Leishmune® para avaliar a capacidade microbicida
de macrófagos e o perfil de resposta imune como a produção de citocinas IFN-γ, TNF-α, IL-12, IL-4 e IL-10.
Resultados e discussão: Nossos dados mostraram coculturas de macrófagos e células T purificadas de cães imunizados com
LdCen−/− e desafiados com L. infantum foram capazes de identificar alta atividade microbicida, especialmente na cocultura
utilizando células T CD4+, em comparação ao grupo Leishmune®. Da mesma forma, co-culturas com células T CD8+ ou CD4+
:Células T CD8+ em
ambos os grupos experimentais foram capazes de detectar uma redução na carga parasitária em macrófagos infectados por L. infantum.
Além disso, coculturas usando CD4+ ou CD8+ ou CD4+
:Células T CD8+ de cães imunizados com LdCen−/− e
Leishmune® foi capaz de identificar níveis mais elevados de citocinas IFN-γ e IL-12, níveis reduzidos de IL-4 e IL-10 e maior
Razão IFN-γ/IL-10. Embora os níveis mais elevados de IFN-γ e a relação IFN-γ/IL-10 tenham sido as marcas registradas do grupo LdCen-/- na cocultura usando células T CD4+, resultando em forte redução do parasitismo, a imunização Leishmune® apresentou um
produção diferencial de TNF-α na cocultura usando CD4+
:Células T CD8+. Conclusão: As distintas condições dos sistemas de co-cultivo foram validadas e capazes de detectar a indução de
proteção. O método descrito neste estudo aplicou uma abordagem nova e mais precisa e foi capaz de produzir resultados laboratoriais
parâmetros úteis para testar e monitorar a imunogenicidade e eficácia das vacinas contra Leishmania em cães.
Assunto
Vacina, Técnicas In Vitro, Linfócitos T CD8-Positivos, Linfócitos T CD4-Positivos, Cães, Leishmaniose Visceral
Palavras-chave
Vaccine, In Vitro Techniques, CD8-Positive T-Lymphocytes, CD4-Positive T-Lymphocytes, Canine, Leishmaniasis
Citação
Curso
Endereço externo
https://parasitesandvectors.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13071-016-1528-z