ELISA sanduíche para detecção de toxina beta produzida pelo Clostridium perfringens tipos B e C
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Zelia Ines Portela Lobato
Andrey Pereira Lage
Vera Lucia Viegas de Abreu
Thais Viana de Freitas
Andrey Pereira Lage
Vera Lucia Viegas de Abreu
Thais Viana de Freitas
Resumo
Padronizou-se o teste ELISA sanduíche para a detecção da beta toxina produzida pelo Clostridium perfringens tipos B e C. A toxina beta foi purificada pelos métodos da afinidade metálica e imunoafinidade e destoxificada pelo método da iodação controlada para a produção de imunoglobulinas e conjugado de IgG de carneiro antibeta toxina. O ELISA sanduíche mostrou-se sensível detectando 2,44ng/mL de toxina beta purificada em PBS e em conteúdo intestinal. Quando comparado com o teste de toxicidade em camundongos o ELISA mostrou ser 1000 vezes mais sensível, detectando 0,01 DMM/mL de toxina beta não purificada em conteúdo intestinal artificialmente contaminado.
Abstract
An ELISA test was developed and standardized to detect beta toxin produced by the Clostridium perfringens types B and C. The beta toxin was purified by metal affinity chromatography and immunoaffinity chromatography and detoxified by the method of controlled iodination. Anti-toxin IgG raised in sheep were purified on a beta toxin affinity column and conjugated to horse radish peroxidase. The sandwich ELISA detected 2.44ng/ml of the purified beta toxin in PBS buffer and intestinal content. The ELISA compared favourably to the toxicity test in mice, showing an 1000 fold higher sensitivity, detecting 0,01 DMM/mL, of nonpurified beta toxin in intestine content artificially contaminated.
Assunto
Clostridium Toxinas, Enterotoxemia, Teste imunoenzimático, Clostridium perfringens
Palavras-chave
ELISA sanduíche, Toxina beta, Clostridium perfringens