Desenvolvimento e avaliação de uma proteína quimérica recombinante para o diagnóstico da Covid-19 usando amostras de soro e urina dos pacientes
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Tese de doutorado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
João Augusto Oliveira da Silva
Camila Simões de Freitas
Rahisa Scussel
Miguel Angel Chávez Fumagalli
Camila Simões de Freitas
Rahisa Scussel
Miguel Angel Chávez Fumagalli
Resumo
O impacto da pandemia de COVID-19 causada pelo vírus SARS-CoV-2 ressaltou o
papel dos testes laboratoriais como estratégia para o controle de doenças,
principalmente. por indicar a presença de anticorpos específicos em amostras de
pacientes infectados. Assim, antígenos recombinantes são relevantes para o
desenvolvimento de testes confiáveis e, proteínas quiméricas recombinantes têm
sido usadas para tal fim. O presente estudo utilizou ferramentas de bioinformática
para selecionar epítopos específicos de células B das proteínas Spike (S) e
Nucleocapsídeo (N) do vírus SARS-CoV-2, com o objetivo de produzir um novo
antígeno quimérico recombinante (N4S11-SC2) e testá-lo como antígeno diagnóstico
da infecção pelo SARS-CoV-2. Onze epítopos derivados da proteína S e quatro da
proteína N foram preditos e utilizados para construir a proteína, que foi expressa,
purificada e avaliada por ensaios de ELISA contra amostras de soro e urina de
pacientes e controles. Resultados mostraram que a proteína N4S11-SC2 apresentou
83,7% de sensibilidade e 100% de especificidade ao utilizar amostras de soro, e
91,1% de sensibilidade e 100% de especificidade usando amostras de urina. O
desempenho da proteína foi também avaliado nas amostras em comparação com as
proteínas recombinantes N e S, com melhores resultados sendo alcançados para a
N4S11-SC2, ao usar amostras pareadas de soro. Em adição, anticorpos anti-N4S11-
SC2 não foram identificados em indivíduos vacinados, mas não infectados, com
Janssen Ad26.COV2.S, utilizando amostras de soro ou urina pareadas. Em
conclusão, o estudo apresenta dados preliminares da eficácia de um novo antígeno
quimérico recombinante como marcador diagnóstico alternativo para a infecção por
SARS-CoV-2 usando amostras de soro ou urina dos pacientes.
Abstract
The impact of the COVID-19 pandemic caused by the SARS-CoV-2 virus has
highlighted the role of laboratory tests as a strategy for disease control, mainly by
indicating the presence of specific antibodies in samples from infected patients.
Therefore, recombinant antigens are relevant for the development of reliable tests,
and recombinant chimeric proteins have been used for this purpose. The present
study used bioinformatics tools to select B-cell-specific epitopes from the Spike (S)
and Nucleocapsid (N) proteins of the SARS-CoV-2 virus, with the aim of producing a
new recombinant chimeric antigen (N4S11-SC2), and testing it as a diagnostic
antigen for SARS-CoV-2 infection. Eleven epitopes derived from the S protein and
four from the N protein were predicted and used to construct the new protein, which
was expressed, purified, and evaluated through ELISA experiments against serum
and urine samples from patients and controls. Results showed that N4S11-SC2
showed 83.7% sensitivity and 100% specificity, when using serum samples weer
used; and 91.1% sensitivity and 100% specificity, when using urine samples were
used in the texts. The protein performance was also evaluated in samples comparing
with the recombinant N and S proteins, with better results being achieved for N4S11-
SC2, when using paired serum samples. In addition, anti-N4S11-SC2 antibodies
were not detected in individuals vaccinated, but not infected, with Janssen
Ad26.COV2.S, using paired serum or urine samples. In conclusion, the study
presents preliminary data on the efficacy of a novel recombinant chimeric antigen as
an alternative diagnostic marker for SARS-CoV-2 infection using serum or urine
samples from patients.
Assunto
COVID-19/diagnóstico, Urina, Proteínas Recombinantes, Ensaio de Imunoadsorção Enzimática, SARS-CoV-2, Dissertação Acadêmica
Palavras-chave
COVID-19, Diagnóstico, Urina, Proteína N4S11-SC2, SARS-CoV-2, ELISA